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PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD POR DIFUSIÓN POR DISCOS
-.las pruebas de susceptibilidad por difusión deben
realizarse según el método de Kirby y Bauer y bajo normas del estándar M2-A5
del NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standars.)
Usted recibe las siguientes cepas control originales del ATCC
(American Type Culture Collection.):
- -.Escherichia coli ATCC 25922 (Q.C.
test para discos de Gram (-) )
- -.Staphylococcus aureus ATCC 25923 (Q.C.
test para cocos Gram (+) )
- -.Escherichia coli ATCC 35218 (Q.C.
test para inhibidores de beta lactamasa.)
- -.Pseudomonas aeruginosa ATCC 27823 (Q.C.test
para aminoglucosidos , beta lactamicos antiseudomonas y
fluoroquinolonas.)
- -.Enterococcus faecalis ATCC 29212 (Q.C.
test del Mueller Hinton)
- -. Consulte por otras cepas de
referencia del ATCC y de nuestra coleccion
Al recibir las cepas, repiquelas en CLDE , AS, o ,MH,
para verificar su viavilidad.
Conservelas en tubos hermeticos con tapa a rosca con ATS en pico de
flauta (Hasta 2 meses) para uso diario. subcultive antes de
utilizarlas.
Conserve un stock por un año en tubos de agar blando o CTA. ROTULE
TODOS LOS TUBOS CON NOMBRE DE LA CEPA Y FECHA DE CADUCIDAD.
FRECUENCIA DEL Q.C.:
-.Para grandes laboratorios el NCCLS recomienda
Q.C. diario o semanal previo test de proficiencia.
Para laboratorios de nuestro volumen LEBBYAC recomienda :
-.Controlar los discos: cada vez que se pone en uso una nueva caja.
una vez por mes si no se abre antes otra caja.
Toda vez que se sospeche que algun disco perdio carga.
NO utilizar discos vencidos.
Conservar los discos a - 20 grados.
No abrir inmediatamente la caja al sacarlos del freezer
CONTROLAR:
.-Los diametros de los halos de inhibicion de las
cepas ATCC deben estar dentro de los rangos aceptables. .-Observar
desarrollo confluente y puro.
.-Las zonas de inhibicion deben ser razonables(sin sobreposicion,
que no sean ovales, etc.)
.-Los antibioticos deben ser los apropiados para la cepa usada.
ACCIONES CORRECTIVAS:
.-Revisar el procedimiento
.-Chequear los materiales usados (incluso las cepas de referencia)
.-Chequear el equipo (heladeras - estufas - pipetas - escala de Mac
Farland)
.-Revise los aspectos tecnicos con la persona que realiza el
procedimiento
.-Si tiene problemas con algun antibiotico en particular consulte
con la seccion bacteriología de L.E.B.B.YA.C.
PROCEDIMIENTO:
.-Temperatura
Las placas de M.H. agar y los discos deben estar a
temperatura ambiente,pero no deben permanecer
mucho tiempo fuera de la heladera o freezer.
.- Preparacion del inoculo
- Hacer una suspencion de las colonias en
solucion fisiologica usando el ansa o un hisopo.
- Ajustar la turbidez a la escala 0.5 de Mac.
Farland.
.- Inoculacion
- Dentro de los 15 minutos de preparado el
inoculo sumerja un hisopo esteril en la suspencion y luego
"escurralo" rotando contra las paredes del tubo para
elimiar el exeso de liquido.
- Hisope la placa entera en tres direcciones y
contra el borde.
- Espere entre 3 y 15 minutos para aplicar los
discos.
.- Aplicacion de los discos
- Aplique los discos usando un dispensador o
pinzas LIGERAMENTE flameadas
- Presione los discos ligeramente contra el agar.
- No ponga discos a una distancia menor de 24 mm
- En lo posible no use mas de 6 discos por placa.
- No recoloque los discos una vez que tomaron
contacto con el agar. La difusion comienza
instantaneamente.
.- Incubacion
- Incube las placas dentro de los 15 minutos de
aplicados los discos
- Incube las placas 16 - 18 hs. a 35 grados.
- Incube los estafilococos otro dia mas si la OXA
dio sensible.
.- Lectura de las placas
- Lea las placas solo si el crecimiento es
confluente
- Contraste sobre una superfice adecuada.
- Mida el diametro de los halos
- Para oxacilina mida con luz
transmitida.Considere cualquier desarrollo dentro del halo como
resistente.
- No considere el "swarming" de Proteus
sp.
- Para TMS no considere el desarrollo pobre, mida
el borde de crecimiento denso.
- Colonias grandes dentro de un halo puden ser de
un cultivo mixto o de variantes resistentes de la misma cepa.
Reaisle tipifique y retestee.Si obtiene el mismo resultado,
informe como resistente.
.-Resultados
- Si el Q.C. esta dentro de los limites
aceptables, reporte las muestras como Sensible,
Resistente o Intermedio.
- Para Staphylococcus: si es OXA
resistente, informar TODOS los demas beta lactamicos
como resistentes independientemente del halo medido.
- Si tiene alguna duda con el informe contactese
con la seccion Bacteriologia de LEBBYAC
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